矩阵信息与事件数据的处理历史,要分开看
FCS 3.1 标准使用 $SPILLOVER 记录溢出信息,较早格式和不同导出软件也可能采用其他关键词。矩阵描述通道间的混入关系,事件数值是否已经处理则是另一件事。可参考 FCS 3.1 标准论文。
| 手中数据的情况 | 下一步核对什么 |
|---|---|
| 识别到文件内矩阵 | 查看各文件的来源、通道匹配及应用状态。识别成功不等于矩阵一定适用。 |
| 未识别到矩阵,确认数值未经补偿 | 索取上机矩阵,或使用匹配的单染对照。 |
| 未识别到矩阵,但数值可能已校正 | 先确认采集与导出设置,避免再次应用补偿。 |
| 矩阵无效或通道无法匹配 | 核对通道名称、维数和数值有效性,不能只看全局开关显示“开启”。 |
从样本工具栏或工作流程进入补偿,默认显示“样本文件内矩阵”。此路径使用各文件自身的矩阵,并非将当前样本的矩阵复制给其他文件。应查看逐文件状态,不只看全局模式;对已经校正的数值重复补偿,可能造成失真。
“使用样本内矩阵”不会补回缺失的信息,也不会计算新矩阵。保留原始文件,并记录本次分析采用的处理方式。
在独立入口导入补偿对照,不必先加入样本列表
补偿对照用于建立校正信息,与后续比较的实验样本分开管理。在 FlowApp 中,不需要先把对照导入“样本”再选择。
- 先加载实验样本,再进入补偿 → “补偿对照数据”。
- 选择对照 FCS 文件或对照文件夹。系统只读取支持的对照文件;不能因为文件名合适,就用普通多色实验样本充当单染对照。
- 逐文件指定“单染对照”“未染对照”或“不使用”;每份单染对照还需选择实际对应的主检测通道。
- 核对需要校正的染料和检测通道是否完整覆盖,不要把所有对照都留在第一个通道,也不要认为能够计算就说明对照齐全。
- 点击“计算”,查看矩阵与警告。应用前,继续核对下方的样本范围。

当前构建器会根据指定对照估计阳性、阴性群体与溢出系数,不代表对照选取、试剂匹配和分群识别已经自动得到验证。
核对对照质量、警告及应用对象
传统补偿应使用匹配的荧光染料和采集设置,阳性信号需足够亮且不能饱和,阴性群体也要适用。微球阳性与不匹配的细胞阴性不能随意拼作一组对照。FMO 用于辅助判断门控边界,不能替代完整的单染补偿对照。可参考流式平台的补偿对照说明。
- 逐一检查目标通道,以及应有的对照文件是否覆盖待校正面板。
- 复核阳性/阴性事件不足、异常系数或矩阵无法求逆等警告。计算成功不是有效性证明。
- 应用后检查相关通道对。补偿后可能出现负值,可通过合适的双指数等显示变换观察,不能仅因出现负值就认定补偿错误。
- 不要反复调整系数,只为把阴性群体“压窄”。补偿校正平均溢出,并不能消除上述平台说明中的溢出扩散。
当前 FlowApp 的应用范围:“应用”会处理当前实验中已就绪的分析样本,并非只作用于当前样本或所选分组。系统会逐文件匹配通道,应核对应用后的每份文件状态,不能假定不兼容的通道已经完成校正。
需要不同面板或校正设置的样本应分开管理,并保留原始数据。对照标签页目前没有另行选择目标分组的应用弹窗。
传统补偿与光谱拆分不是同一个流程,此入口也不是完整的光谱参考对照与拆分向导。两者区别可参考免疫学流式分析指南。
矩阵和对照都没有,先找回处理记录
联系上机人员或数据提供者,索取原始导出、采集设置或对照。“未检测到”可能与导出方式、数据已经处理有关,不能直接推断实验漏做了补偿。
FlowApp 没有经过验证的“任意多色样本无对照重建传统补偿矩阵”路径。图看起来更整齐,或 AI 给出调整建议,都不等于校正已被验证。若无法追回记录,应保留不确定性说明,不把受影响的荧光测量当作已确认的结果。
补偿、显示变换和 QC,各自解决不同问题
补偿校正通道混入;显示变换改变数值范围的呈现方式;采集质控标记可疑的测量变化。调整坐标轴,或者接受 QC 标记,都不会计算补偿,也不能修复不合适的对照。